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染色不均?脫色總過度?革蘭氏染色痛點一次解決!

更新時間:2026-01-20      點擊次數:47

革蘭氏染色——這個由丹麥科學家漢斯·革蘭在1884年發明的技術,至今仍是微生物實驗室的基石。依據細菌細胞壁結構和化學成分的不同,通過簡單的紫色與紅色區分,它告訴我們眼前的細菌是革蘭氏陽性(G+還是革蘭氏陰性(G-為細菌鑒定、感染診斷、抗生素選擇提供了最初步卻至關重要的依據。然而,正是這項看似基礎的技術,卻讓無數檢驗人員又愛又“恨"。


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標準五步法,步步是挑戰

第一步:涂片與熱固定


  1. 制備涂片:取一滴無菌水或生理鹽水于載玻片中央,用無菌接種環挑取少量菌落,均勻涂布成直徑約1厘米的薄層膜。

  2. 風干:在空氣中自然風干。

  3. 固定:將有菌膜的一面朝上,快速通過酒精燈火焰2-3次。

取菌、涂片、過火固定——聽起來簡單,但菌量多少算合適?火焰溫度多高算剛好?菌量不足影響鏡檢,過熱則導致細胞變形。全憑手上功夫,新手往往需要數月練習才能穩定發揮。


第二步:結晶紫初染(1分鐘)

  1. 用結晶紫染液覆蓋菌膜,開始計時,染色1分鐘。

  2. 用緩流自來水輕輕沖洗,洗去多余染液,甩干玻片上多余水分。

染液是否均勻?是否沉淀?這些細節都直接影響最終效果。

第三步:碘液媒染(1分鐘)

  1. 用碘液覆蓋菌膜,染色1分鐘。

  2. 再次用細緩水流輕輕沖洗,甩干。

碘液與結晶紫形成復合物,這是染色成敗的關鍵化學反應之一。

第四步:乙醇脫色(5-15秒)

  1. 將載玻片傾斜,用95%乙醇滴流沖洗涂片,直至流下的乙醇幾乎無色(此過程通常僅需5-15秒,具體時間需經驗判斷)

  2. 立即用緩流水輕輕沖洗,脫色結束。

這是整個流程中變數最大的一步。脫色不足,G-菌可能被誤判為G+;脫色過度,G+菌又會“變紅"成為假陰性。短短幾秒鐘的差異,可能導致相反的結論。

第五步:沙黃復染(30-60秒)

最后一步的復染為G-菌“上色",完成最終的色彩區分。

  1. 用沙黃染液覆蓋菌膜,復染30秒至1分鐘。

  2. 細緩水流沖洗干凈,用吸水紙輕輕吸干或自然風干,鏡檢觀察。

染色不均?脫色總過度?革蘭氏染色痛點一次解決!

左:革蘭氏陰性菌(G-);右:革蘭氏陽性菌(G+

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常見問題解析:為什么你的結果可能不可靠?

Q1

脫色環節如何把握?為什么說“失之毫厘,謬以千里"?


脫色是革蘭氏染色中最關鍵也最難標準化的一步,全憑操作者經驗控制時間:

  • 脫色不足:G-菌本應被脫去的結晶紫-碘復合物未被洗凈,復染后仍呈紫色,導致假陽性

  • 脫色過度:G+菌的復合物也被溶出,最終被染成紅色,造成假陰性

  • 解決方案:需密切觀察流下乙醇的顏色變化,新手建議用標準菌株對照練習。


Q2

為什么會出現結果不明確或顏色不典型?


  • 菌齡過老:超過24-48小時的G+菌細胞壁可能降解,染色后呈紫紅混雜

  • 涂片過厚:脫色劑無法滲入菌膜深層,造成內部細菌脫色不勻

  • 解決方案:使用18-24小時新鮮菌,制備薄而均勻的涂片。


Q3

染色后鏡檢,背景為什么有雜質或沉淀?怎么辦?


  • 多為染液沉淀或沖洗不當所致。

  • 解決方案:染液需過濾使用,每一步沖洗后應將玻片充分瀝干。


Q4

熱固定時要注意什么?


  • 固定不足:菌體在染色過程中被沖脫

  • 過熱固定:細胞變形破裂,影響形態判斷

  • 解決方案:玻片在火焰上快速通過2-3次,以不燙手背為宜。


Q5

為什么鏡檢時總找不到足夠細菌?


  • 取菌量不足

  • 涂片后沖洗水流過猛,沖走菌膜

  • 解決方案:挑取適量菌苔,所有沖洗步驟使用緩流水。


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傳統方法的三大困境


  1. 結果不一致:不同操作者、不同時間、不同狀態,都可能得到不同的染色結果。

  2. 效率低下:單張玻片完整流程需6-10分鐘,批量處理時更是耗時費力。

  3. 質量控制難:缺乏標準化流程,結果重復性難以保證。


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破局:當經典技術遇上智能自動化


針對這些長期存在的實驗室痛點,我們推出了HD-GM100型全自動革蘭氏染色儀——一款真正實現革蘭氏染色全流程自動化的設備,將傳統依賴人工經驗的繁瑣步驟整合為智能化系統,可顯著提升染色質量與操作效率。


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染色過程智能標準化

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  • 自動化流程:上機后自動執行結晶紫初染→碘液媒染→乙醇脫色→品紅復染→離心干燥全流程

  • 程序可編程:內置9種預設程序,支持自定義各步驟時間與染色級別(1-9級)

  • 智能控制:脫色時間精準可控,避免人工脫色不足或過度,杜絕假陽性/假陰性

  • 干燥高效:染色時低速運轉(20rpm),甩干時高速離心(≥1500rpm),快速完成玻片干燥


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高效率與高一致性

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  • 高通量處理:單批次支持1-24張玻片同時染色,最佳裝片數12/16/24片

  • 快速染色:標準流程最快≤4分鐘,每小時可處理≥200張玻片

  • 均勻染色:直線噴霧法精準覆蓋每張玻片,避免交叉污染,保證染色均勻性

  • 連續運行:支持批量連續作業,滿足疾控、海關、科研等機構大規模檢測需求


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成本控制與便捷維護

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  • 試劑節約:單張玻片試劑消耗僅0.5–1.5ml,智能控制用量

  • 自動清洗:內置管路自動清洗程序,無需人工拆洗,維護簡便

  • 即開即用:出廠配置齊全(主機、玻片托盤、備用噴嘴、染料套裝),降低啟動成本


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應用場景全覆蓋

No.4



  • 臨床微生物實驗室:快速準確的病原菌初步鑒定,為臨床用藥提供及時依據

  • 疾控與公共衛生:大批量樣本篩查,應對突發公共衛生事件

  • 科研與教學:標準化染色結果,保障科研數據的可靠性;直觀的教學演示工具

  • 第三方檢測機構:提升檢測效率,保證報告質量


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不僅僅是替代,更是進化

HD-GM100以自動化重塑革蘭氏染色流程,為各類微生物實驗室提供高效、一致、可追溯的染色解決方案,讓染色標準化,讓結果更可信。


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