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微生物采樣過程中如何避免交叉污染?

更新時間:2025-06-29      點擊次數:139
在微生物采樣過程中,交叉污染可能源于設備殘留、人員操作、環境微生物或樣本間相互污染,需從全流程實施嚴格的防污染措施。以下是分場景的標準化操作指南及技術要點:
 
一、采樣前的設備與耗材滅菌
 
1.硬件滅菌規范
 
可重復使用設備:
 
金屬采樣頭(如撞擊式采樣器):121℃高壓蒸汽滅菌20分鐘(GB/T38512-2020),或使用70%乙醇+火焰灼燒(適用于現場應急處理)。
 
塑料部件(如采樣泵管路):用0.1%過氧乙酸浸泡30分鐘,再用無菌水沖洗3次,晾干后紫外照射(254nm,≥30分鐘)。
 
一次性耗材:
 
培養皿、采樣袋等需選用輻照滅菌產品(鈷-60照射,劑量≥25kGy),拆封前檢查包裝完整性(ISO11607-1標準)。
 
2.滅菌效果驗證
 
每次滅菌后進行生物監測:放入嗜熱脂肪芽孢桿菌ATCC7953孢子條,滅菌后培養(56℃,48小時),菌落數應為0(GB8599-2021)。
 
二、采樣現場的操作防污染體系
 
1.人員無菌操作準則
 
三級防護要求:
 
普通環境:穿戴一次性實驗服+醫用手套(如丁腈手套),采樣前用75%乙醇擦拭手套表面。
 
高風險環境(如臨床樣本):需穿戴無菌隔離衣+護目鏡+雙層手套,每采樣1次更換外層手套。
 
動作規范:
 
采樣時手臂避免越過采樣口上方,保持采樣頭距身體≥30cm,呼吸方向與采樣口呈90°夾角。
 
禁止在采樣區域內整理頭發、觸摸面部,如需調整設備,需先更換手套或消毒手部。
 
2.空間分區與氣流控制
 
采樣區劃分:
 
設置50cm×50cm的無菌操作區,用75%乙醇噴灑桌面形成消毒帶,采樣器放置于區域中央。
 
高潔凈度場景(如ISO5級潔凈室)需在層流工作臺(風速0.36-0.54m/s)或生物安全柜(BSC-II級)內操作。
 
氣流干擾控制:
 
采樣前關閉門窗,停止空調系統運行10分鐘(避免氣流攜帶外源微生物),人員走動控制在1米外。
 
三、樣本采集過程的隔離措施
 
1.分批次采樣防交叉方案
 
批次間隔消毒:
 
每完成1個樣本采樣后,用75%乙醇擦拭采樣器外殼、采樣口及操作臺面,作用5分鐘后再進行下一樣本采集。
 
若采集不同類型樣本(如環境樣本與臨床樣本),需更換全套采樣頭及管路,避免殘留微生物混淆。
 
2.特殊樣本的隔離技術
 
高濃度樣本處理:
 
處理污水、糞便等高負荷樣本時,使用帶負壓過濾的采樣器(如MilliporeEZ-Pak),采樣后立即密封濾芯,防止氣溶膠擴散。
 
致病菌采樣:
 
采用生物安全型采樣頭(如帶HEPA過濾的閉合式采樣器),采樣后放入防漏金屬罐(內層鋪吸水紙+0.5%次氯酸鈉溶液)。
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